Ваш выбор - жизнь!

Послушным воле Творца,
логике Природы,
голосу Разума

Навигация

Связаться

E-mail: vladimir.zhukoff2013@yandex.by

Телефон: +375 17 3761822

Сотовый: +375 29 6313536

Лечение в Израиле


Глобус Беларуси - Архитектурные и иные достопримечательности Беларуси:


Карты Беларуси:



Праздники сегодня

Экспериментальные исследования противоопухолевой активности электроактивированного раствора анолита

Gitelman D.S.
Deutschland. Wulfrath.
gitelmand@mail.ru
gitelmand@aol.com

Электроактивация – сравнительно новая отрасль медицины, открывающая широкие возможности применения водных растворов, обработанных электрическим током, в качестве лекарственных средств.

Существуют различные модификации аппаратов, позволяющие получать электроактивированные растворы различных типов:

Аппараты модульного типа для производства электроактивированного водного раствора анолита (ЭВР-А) – раствора, получаемого в анодной зоне аппарата, с рН от 7 до 1,8 Ед., окислительно-восстановительным потенциалом от +130 мВ до +1200 мВ. Такой раствор обладает высокой антибактериальной и антисептической активностью, широко применяется в области дезинфекции и стерилизации, а также в хирургической практике [1]. В настоящее время сконструированы аппараты, производящие т. н. нейтральный анолит, с рН около 7 Ед., обладающий такими же сильными антисептическими свойствами, как и кислый анолит [2].

Аппараты непрямого электрохимического окисления крови типа ЭДО-3, позволяют получать из гипохлорита натрия стерильный раствор и вводить внутривенно. Электрохимически активированный раствор гипохлорита натрия обладает высоким антибактериальным и детоксицирующим действием, стимулирует процессы репаративной регенерации [3, 4].

Аппараты немодульного типа, производящие электроактивированный раствор анолит ЭВР-А и электроактивированный раствор католит ЭВР-К одновременно. При этом можно получать в анодной зоне аппарата анолит с параметрами рН от 7 до 1,8 Ед., окислительно-восстановительным потенциалом от +130 до +1200 мВ и в катодной зоне аппарата католит с параметрами рН от 7 до 12 Ед., окислительно-восстановительным потенциалом от +130 до –840 мВ. Эти растворы применяются наружно и per os, в экспериментах также внутрибрюшинно. При этом ЭВР-К определенных параметров обладает свойствами ускорять процессы репаративной и физиологической регенерации, стимулирует иммунные процессы [5].

К области электроактивации относится также бесконтактная активация, позволяющая получать биологически активные растворы без изменения их химического состава [6].

Целью данного исследования являлось изучение противоопухолевой активности ЭВР-А.

Основными требованиями к противоопухолевым средствам является их противоопухолевая активность, возможность длительного использования, отсутствие токсических проявлений.

Учитывая антисептические, детоксицирующие свойства ЭВР-А и его аналогов, а также относительно щадящее влияние на иммунную систему [7], экспериментальные исследования в этой области представлялись очень перспективными.

Исследования и материалы.

Препарат ЭВР-А получали на аппаратах немодульного типа фирмы "Эсперо". Исходным раствором являлся физ. раствор. Критериями препарата ЭВР-А служили рН и ОВП. Раствор получали в анодной зоне аппарата путем активирования до определенных параметров.

Исследования проводились на мышах линии BALB/C весом 19 — 24гр., на штамме АКАТОН (аденокарцинома тонкого кишечника).

Эксперимент проводился на 60 мышах. Штамм перевивался в правый бок. На 7 день перевивки животные были разделены на 3 группы, по 20 мышей в каждой.

1 группа – получала препарат ЭВР-А в количестве 3,75мл/кг веса, ежедневно, внутрибрюшинно, No 10.

2 группа – получала препарат ЭВР-А в количестве 3,75мл/кг веса, ежедневно, непосредственно в опухоль, No 10.

3 группа – получала химиопрепарат циклофосфан в количестве 15 мг/кг ежедневно, внутрибрюшинно, No 10.

4 группа – служила контролем и получала физ. раствор по 0,5 мл на мышь ежедневно, внутрибрюшинно, No 10.

Доза вводимого препарата была определена эмпирическим путем и основывалась на данных экспериментальных исследований, проделанных ранее.

Забой производили на 22 день перевивки опухоли.

Противоопухолевую активность препаратов определяли по проценту торможения роста опухоли. Процент торможения вычисляли по формуле:

%торм. = ( (Ср. вес опух. контр. гр. - Ср. вес опух. в опытн.гр.) / Вес опухоли в контр. гр. ) * 100%

Критериями также служили:

  • Вес животных до лечения и перед забоем.
  • Вес опухоли
  • Вес селезенки
  • Количество умерших животных.
  • Цитоморфологические исследования опухоли.

Таблица 1.

Препарат
Доза

Вес
животных, гр.

Вес
% торможения опухоли
Выживаемость
Опухоли, гр.
Селезенки, гр.
Живые
Павшие
Анолит внутрибр. введение
3,75 мл/кг
До
23,3
2,65
0,3
61,00%
18
2
После
19,4
Анолит в/опухол. введение
3,75 мл/кг
До
20,7
2,75
0,2
62,50%
16
4
После
18,7
Циклофосфан
15 мл/кг
До
20,6
0,6
0,1
99,10%
6
14
После
14,4

Физ. р-р

0,5 мл
До
21,2
7,06
0,31
-
18
2
   

Из таблицы видно, что потеря в весе при лечении ЭВР-А была у животных значительно ниже, чем у животных, принимавших циклофосфан.

Рост опухоли в группах, получавших лечение ЭВР-А внутрибрюшинно и внутриопухолево сокращался на 61 % и 62,5 %, что было меньше, чем в группе мышей, получавших циклофосфан.

В то же время выживаемость животных в группах, получавших ЭВР-А, была значительно выше, чем в группе, получавшей циклофосфан.

Эти данные показывают, что ЭВР-А, задерживая рост опухоли, в то же время является не токсичным для организма.

Очень интересные данные по механизму действия ЭВР-А были получены при цитоморфологическом и гистологическом анализе опухоли. Эти данные позволяют дать морфологическую оценку динамике, прогрессии и регрессии опухоли, подвергшийся лечебному воздействию ЭВР-А.

Цитоморфологические исследования.

Материалом служила перевитая мышиная опухоль – аденокарцинома тонкого кишечника (АКАТОН) павших или забитых животных.

Опухоль изучали макроскопически, затем из отобранных участков ткани готовили препараты-отпечатки. Остальную ткань помещали в 10 % нейтральный формалин. После соответствующей проводки по спиртам и заливки в парафин, готовили гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином.

При микроскопии препаратов учитывали следующие цитоморфологические критерии:

Клеточный (форма, величина клеток, ядер, ядрышек, митотический индекс, структура хроматина, окрашиваемость, сохранность ядра, цитоплазмы).

Функциональный (наличие в цитоплазме слизи, капель жира, пигментных зерен, выживаемости).

Структурный (расположение клеток разрозненно, пластами и структурами, имитирующими железы)

Фон цитологического препарата (детрит, белковые зерна, белковый секрет, слизь, жировые вакуоли).

Цитологический анализ проводился при помощи микроскопа Leica-Galen, окуляр 7x, объектив 100 x, масляная иммерсия.

Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Показатели
Анолит
Циклофосфан
Физ. р-р

внутрибр.
введение

в/опухол.
введение

Митотический индекс %

1,1
0,9
-
2,6

Индекс выживаемости клеток

47,4
25,6
4,5
64,4

Величина ядер:

Крупные

3,3
2,5
2
4,75

Средние

56,5
40,8
5
61,5

Мелкие

47,6
40,2
7
34

Многоядерность

2
2
-
73

Кол-во ядрышек

1 - 6
1 - 6
0 - 1
0 - 3

Кол-во ядер с увеличением ядрышек %

80
80
-
30

Гигантские полиплоидные клетки %

2,1
1,2
-
5

Патология митоза %

79,5
83,5
-
22,6

Преждевременная конденсация хромантина

+
+
-
-

Задержка фаз митоза

метафаза

К-митоз

-
-

Пульверизация хромосом

+
+
-
-

Как видно из данных таблицы, при приеме ЭВР-А митотический индекс, наиболее точно характеризующий митотическую активность ткани снижается. При введении циклофосфана митозов обнаружено не было.

Форма ядер была очень разнообразной, как в опытной, так и в контрольной группе: наиболее часто встречались ядра округлой и овальной формы, в группах, получивших ЭВР-А различия в форме ядер были более выражены, чем в интактной группе. Увеличенное количество клеток, содержащих увеличенное число ядрышек в ядре в опытных группах было значительно больше, чем в интактном контроле (80 % и 30 %).

Патология митоза при в/брюшинном введении анолита составила 79,5 %, при в/опухолевом введении 83,5 %. Среди типа патологий митоза у животных, получавших анолит, преимущественно наблюдались преждевременная конденсация хроматина, пульверизация хромосом, задержка митоза на метафазе и мосты, а также К-митоз (колциновый митоз). Состояние хроматина в опухолевых клетках опытной группы было представлено в виде глыбок различных размеров, чаще это были крупные и средние, зернистость также была крупная и средняя, наблюдалась грубая сетчатость, петлистость. Цитоплазма опухолевых клеток в опытных группе была вакуолизированной с признаками дистрофии и дегенерации.

Из функциональных изменений на первый план выдвигается выживаемость клеток. Так индекс выживаемости (ИВ) при в/брюшинном введении анолита был 47,7 %, при в/опухолевом введении 25,6 %, при введении циклофосфана 4,5 %.

В цитоплазме опухолевых клеток опытной группы было обнаружено много слизи, капель жира, пигментные зерна. Характерными структурными изменениями было разрозненное расположение клеток, фон цитологического препарата содержал много детрита, слизи, белковый секрет.

Обсуждение результатов:

Снижение митотического индекса в опытных группах, увеличение патологических митозов с повреждением митотического аппарата, а также наличие мостов, т. е. неполное расхождение хромосом в анафазе свидетельствует о нарушениях в пролиферации клеток и появлении аберраций хромосом.

Состояние хроматина опухолевых клеток опытной группы, небольшое количество крупных трансформированных клеток, увеличение в них количества ядер, свидетельствует о дистрофических и дегенеративных изменениях в ядрах, приводящих к их гибели и лизису. Все это отразилось на физиологическом состоянии клеток. Отмечено наличие полиморфизма, отсутствие образования стабильных тканевых структур, которое наиболее было выражено при введении препарата в опухоль.

Дистрофические и дегенеративные изменения наблюдались также и в цитоплазме: множественные разной величины очаги некроза, в которых содержится большое количество лейкоцитов и макрофагов.

В опухолевых клетках при обоих видах введения препарата наблюдалось наличие пустых клеток, теней ядер, голых ядер, слизи.

Выводы:

Данный эксперимент выявил противоопухолевые свойства у препарата с качественно новыми для медицины физическими и химическими свойствами.

Цитотоксическая активность препарата в данном виде относительно других цитостатиков невелика, но представляет большой интерес механизм воздействия ЭВР-А на опухолевую клетку. Реальна возможность увеличения противоопухолевой активности препарата путем изменения солевого состава водных растворов, рН, ОВП, введения микроэлементов или органических соединений.

Учитывая антисептические, детоксицирующие свойства ЭВР-А и его аналогов, относительно щадящее влияние на иммунную систему и индифферентность по отношению к здоровым тканям [9], дальнейшие исследования в этой области представляются очень перспективными.

Литература:

  1. Зарезаев О. А., Корнева Т. К., Паничева С. А. Обработка рук хирурга электрохимическими активированными растворами и микробиологический контроль метода. // Тезисы докладов всероссийской конференции "Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности". Москва. 20 — 22 декабря 1994 г., с. 88 -91.
  2. Электрохимическая активация: История, состояние, перспективы. Академия медико-технических наук Российской Федерации. Под ред. В. М. Бахира. – М.: ВНИИИМТ, 1999 г. с. 36 -107.
  3. Петросян Э. А. Патогенетические принципы и обоснование лечения гнойной хирургической инфекции методом непрямого электрохимического окисления. Автореферат на соискание ученой степени доктора мед. наук. 1991г.
  4. Метод непрямой электрохимической детоксикации организма с использованием гипохлорита натрия в практической медицине.: Методические рекомендации, Добриянец А. И., Жидков С. А., Кузьмин Ю. В. – Минск, 2000 – 26 с.
  5. Вахидов В. В, Мамаджанов У. Д., Касымов А. Х. и др. Способ получения жидкости с биологически активными свойствами. Авторское свидетельство СССР. 1982г.
  6. Гительман Д. С., Збрижер Э. Р. Исследование влияния электроактивированного раствора католита на иммунный ответ и кроветворение у сублетально облученных мышей. // Тезисы докладов всероссийской конференции "Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности". Москва. 20 — 22 декабря 1994 г., стр. 23 -25.
  7. Широносов В. Г., Широносов Е. В. Устройство для бесконтактной активации жидкости, а. с. No 2000108654/12(009166) приоритет от 10.04.2000.

Частные примечания.

Хочу также поделиться клиническим опытом внутриопухолевого применения препарата.

ЭВР-А применялся у больных раком молочной железы, III и IV стадии, с множественными метастазами, с вколоченными или распадающимися опухолями. Препарат применялся в виде инъекций, в/опухолевое введение, 10 — 30 мл на введение, ежедневно.

При применении препарата отмечалось резкое замедление распада опухоли, уменьшение или исчезновение выделений, исчезновение гнилостного запаха, значительное уменьшение размеров опухоли.

Важным было резкое уменьшение или исчезновение болевого синдрома. Удалось уменьшить или полностью исключить применение противоболевых средств. Препарат уменьшал или снимал болевой синдром на 12 и более часов. Некоторые больные перешли позже на 2-х кратное применение препарата в день, но к морфию не вернулись.

Самое главное в применении препарата было увеличение средней продолжительности жизни больных и относительно удовлетворительное их состояние.

"МИС-РТ"-2005. Сборник №36-1

http://ikar.udm.ru

<<ВЕРНУТЬСЯ К СОДЕРЖАНИЮ РУБРИКИ